Atelier 10
Phénotypage métabolique par cytométrie spectrale : une approche fonctionnelle et multiparamétrique
Co-animateurs : Charles THOMAS & Serge MONIER (UMR 1231 / Plateforme ImaFlow)
Contenu de l’atelier :
Cet atelier propose une initiation à l’analyse du métabolisme cellulaire et de la fonction mitochondriale à l’échelle unicellulaire par cytométrie spectrale. La méthode s’appuie sur l’utilisation de sondes fluorescentes spécifiques, comme le 2-NBDG (analogue du glucose) pour mesurer la glycolyse, et le Mitotracker Green FM pour évaluer la densité mitochondriale. Elle sera illustrée ici sur des macrophages activés, dont la plasticité métabolique reflète leur état d’activation.
L’atelier inclura une présentation théorique, suivie d’une mise en pratique visant à analyser simultanément le métabolisme (glycolyse, mitophagie) et le phénotype immunitaire des macrophages par marquage multi-couleur. Cette approche est transposable à d’autres types cellulaires (cellules en culture ou cellules circulantes), et peut également s’appliquer à des tissus dissociés (ex. par digestion enzymatique). Elle est également transposable à l’étude du métabolisme lipidique ou à d’autres aspects de la fonction mitochondriale.
Le marquage au NBDG constitue une approche complémentaire à l’imagerie métabolique par TEP au ¹⁸FDG : elle permet de détecter les cellules à fort métabolisme glycolytique au sein d’un tissu, tout en apportant un immunophénotypage précis des sous-populations impliquées, ce que ne permet pas l’imagerie médicale classique.
Nombre de participant(e)s : 6 maximum.
Public :
Chercheu(ses)rs, étudiant(e)s avancé(e)s et professionnel(le)s travaillant dans le domaine de la cytométrie, souhaitant acquérir ou approfondir des compétences théoriques et techniques dans l’étude du métabolisme cellulaire et de la fonction mitochondriale, à l’échelle cellulaire et tissulaire.
Cet atelier s’adresse également à des participant(e)s déjà familier(e)s avec l’étude du métabolisme et de la fonction mitochondriale via des approches non cytométriques (telles que la mesure de la respiration cellulaire, l’évaluation de l’activité des complexes de la chaîne respiratoire, ou l’observation mitochondriale en microscopie), disposant par ailleurs d’un niveau intermédiaire avancé en cytométrie en flux.
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Pré‐requis :
- Maîtrise des bases de la cytométrie en flux (principe, acquisition, compensation, gating).
- Connaissances générales sur le métabolisme cellulaire et la fonction mitochondriale.
- Expérience en manipulation de cellules (culture, marquage, utilisation de sondes fluorescentes).
- Idéalement, pratique préalable du marquage multiparamétrique et/ou de l’analyse de données cytométriques.
Modalités pratiques : la formation se déroulera en français.
Contenu :
- Présentation théorique (~1h) sur les principes, les sondes utilisées et les applications de l’analyse métabolique par cytométrie spectrale.
- Atelier pratique (~3h) incluant le marquage des cellules, l’acquisition et l’analyse des données en cytométrie spectrale.
Instrument(s) utilisé(s) : Cytek Aurora - Flow Jo
Lieu :
UFR des Sciences de Santé
Imaflow (plateforme de cytométrie en flux)