Atelier 3
Méthode de standardisation des cytomètres pour la réalisation d’études longitudinales
Co-animateurs : Julie Cazareth (Valbonne) et Pierre Grenot (Marseille)
La standardisation a pour but de produire des résultats fiables et reproductibles au cours du temps. En neutralisant la variabilité de sensibilité des instruments à chaque acquisition, la standardisation du cytomètre va permettre de réduire les écarts de mesure entre les expériences et ainsi comparer de manière plus fine les résultats au cours du temps (pourcentage, moyenne de fluorescence…). Cette méthodologie de standardisation peut être utilisée pour transposer des réglages d’un instrument à un autre et permettre ainsi la comparaison des résultats obtenus sur deux machines différentes.
La standardisation comprend deux étapes fondamentales qui seront abordées lors de cet atelier :
- la caractérisation des cytomètres (résolution, sensibilité),
- les réglages et optimisation de la sensibilité des cytomètres.
L’atelier sera réalisé avec un Attune NXT ThermoFischer ScientificTM sur lequel nous établirons une ligne de base avec des billes de calibration qui permettent de calculer le bruit de fond électronique (electronic noise) et optique (B optical background).Nous établirons ensuite une « voltration » pour déterminer les voltages minimaux et optimaux à l’aide d’index de marquage (stain index). La série de réglage permettra aux utilisateurs de recycler les mêmes réglages de base (réglage de référence), de valider des concentrations d’anticorps monoclonaux et les indexes de marquage (stain index). Nous pourrons ainsi prouver la robustesse d’un panel au cours du temps et l’utilité d’ajouter un contrôle interne de standardisation sera également abordée. Ce protocole de standardisation sera utilisé pour réaliser une standardisation entre un Attune NXT 4 lasers équipé (4 lasers) et le CytoFlex LX (5 lasers) sur un panel constitué de 10 fluorochromes.
A l’issue de cet atelier, les participants auront un aperçu des phases clés d’une standardisation et de la caractérisation des performances applicables à tout type de cytomètre. Les participants sauront optimiser les réglages des PMTs du cytomètre et les fixer dans le temps pour parvenir à un protocole standardisé de marquage en cytométrie multi-paramétrique.