Atelier 5
Cycle cellulaire et cytométrie en flux
Jean-Francois Mayol
Le cycle cellulaire est un processus essentiel pour le maintien de l’homéostasie tissulaire. Sa dérégulation est à l’origine de phénomènes de prolifération incontrôlée débouchant sur des pathologies tumorales. D’autre part certains agents anti-cancéreux ont pour objectif de perturber volontairement le cycle cellulaire des cellules tumorales afin de limiter leur prolifération et éventuellement les orienter vers des processus de mort cellulaire.
La cytométrie en flux est depuis de nombreuses années une méthode de choix pour évaluer la répartition des cellules dans les différentes phases du cycle cellulaire. L’analyse du cycle cellulaire par cytométrie en flux est basée sur la mesure du contenu en ADN des cellules après marquage stœchiométrique par une sonde fluorescente. Ainsi, il est possible d’obtenir un histogramme monoparamétrique représentant les différentes phases du cycle : G0/G1, S et G2/M.
La principale difficulté dans l’analyse du cycle cellulaire est d’obtenir une bonne discrimination des différents pics de populations cellulaires présentes ces différentes phases du cycle. Différentes méthodologies existent : méthode des miroirs, déconvolutions logicielles. Mais une analyse rigoureuse passera tout d’abord par une préparation minutieuse des échantillons et des conditions d’analyse de qualité, c’est à dire réunir toutes les conditions qui permettent d’avoir des coefficients de variations des pics de fluorescence qui soient les plus faibles possible.
Lors de cet atelier, destiné à des personnes qui souhaitent découvrir le B-A-BA de l’analyse du cycle cellulaire, il y aura :
- une partie théorique portant sur la description des fluorochromes et des techniques analytiques,
- une partie pratique portant sur l’analyse de marquages mono-paramétriques et bi-paramétriques du cycle cellulaire sur un instrument,
- des travaux dirigés avec l’analyse de fichiers de cytométrie et leur interprétation.
Chacune de ces partie a pour objectif de donner au participant les éléments clés permettant de faire une analyse du cycle cellulaire dans des conditions les plus rigoureuse possible.