Atelier 10
Les morts cellulaires : utilisation de la cytométrie et de l’imagerie
Christian Muller et Livine Duban
La mort d’une cellule est un processus biologique normal dans tout organisme vivant. À l’opposé, l’incapacité des cellules à mourir après activation des récepteurs de morts par le système immunitaire, est à l’origine des cancers et aussi de la résistance de certaines tumeurs aux traitements thérapeutiques.
A ce jour il est décrit plusieurs processus de mort cellulaire, appelés « apoptose », « mort cellulaire autophagique » et « nécrose ». Ces processus létaux peuvent être caractérisés selon des critères morphologiques (taille réduite et granulation augmentée), des critères enzymatiques (activation des caspases, flippases etc.) et des contenus en ADN (sub-Go/G1).
En cytométrie (image et flux) il est courant de suivre par différents fluorochromes la viabilité (mesure de l’intégrité membranaire, mesure de l’activité métabolique) et d’analyser l’apoptose (annexine V, caspases 3, 8/9, dépolarisation mitochondriale, fragmentation de l’ADN). Nous allons nous intéresser dans cet atelier à suivre la mort cellulaire induite dans des cellules cancéreuses humaines cultivées de manière classique en 2D mais aussi en sphéroïdes 3D, une physiologie plus proche des tumeurs cancéreuses in vivo. Au cœur des sphéroïdes, il y a apparition de cellules souches cancéreuses (CSC). Ces cellules sont nettement plus résistantes au traitement classique et sont actuellement les nouvelles cibles des thérapies émergeantes comme par exemple l’induction de leur différenciation pour les rendre inoffensives. Afin de bien caractériser ces CSC cultivé en plateforme microfluidique (CellAsic) et les suivre dans leur mort cellulaire, en plus des tests d’apoptose, l’utilisation de sondes ARNm (microARN SmartFlare) nous permet un contrôle optimal des conditions de traitement des cellules.